小鼠單克隆抗體Ig類/亞類鑒定ELISA試劑盒
一、試劑原理：

本試劑盒利用雙抗體夾心法鑒定小鼠淋巴細(xì)胞雜交瘤培養(yǎng)上清中單克隆抗體或特異親和純化單克隆抗體的類和亞類（可區(qū)分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA）。采用小鼠抗體共有位點(diǎn)的二抗包 被微孔板，與加入的培養(yǎng)上清中的小鼠抗體結(jié)合，再加入HRP標(biāo)記的抗小鼠各類、亞類的抗體來分別反應(yīng)， 隨后用TMB底物系統(tǒng)顯色并用稀硫酸終止，再通過酶標(biāo)儀檢測吸光度來判斷被測單克隆抗體的類或亞類。本 試劑盒具有極高的分辨率，是您鑒定小鼠單克隆抗體類、亞類的可靠工具。

二、試劑組份：
酶標(biāo)板含自封袋2個(gè)，2ⅹ96孔；標(biāo)本稀釋液15ml；通用陽性對照1.5ml；顯色劑A15ml；通用陰性對照1.5ml；顯色劑B15ml；酶標(biāo)二抗 6種6×4ml；反應(yīng)終止液15ml；20×清洗液50mL；加樣圖2份；封板膜4張；說明書1份。

三、使用范圍：用于培養(yǎng)上清中小鼠單克隆抗體Ig類、亞類的鑒定以及相關(guān)內(nèi)容的研究。

四、使用方法：

1、首先將試劑盒恢復(fù)室溫（大約30分），然后用純水把清洗液配成工作濃度（一份濃縮清洗液加19份純水）。

2、取出酶標(biāo)板。每個(gè)標(biāo)本需要6孔，陽性對照6孔，陰性對照6孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。

3、將標(biāo)本檢測孔每孔先加入標(biāo)本稀釋液各50μl。然后將50μl細(xì)胞培養(yǎng)上清（或特異親和純化的抗體）再加入酶標(biāo)微 孔板，每個(gè)標(biāo)本加6孔；陽性對照和陰性對照各6孔每孔100μl此處不加標(biāo)本稀釋液。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

4、棄去板內(nèi)液體，手工洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干（或機(jī)洗5遍）。再在每個(gè)標(biāo)本的6孔中分別加入6種 酶標(biāo)二抗各100μl，通用陽性、陰性對照的各孔也一樣。在加樣圖上或酶標(biāo)板上做好標(biāo)記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

5、吸棄板內(nèi)液體，手工洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干（或機(jī)洗5遍）。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各50μl，換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。

6、本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結(jié)果，看顯色藍(lán)的那個(gè)孔所對應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的Ig類或亞類。更可將反應(yīng)終止液（每孔50μl）終止反應(yīng)后用酶標(biāo)儀450nm測定波長，630nm參考波長雙波長測定結(jié)果，參看高值孔所對應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的Ig類或亞類（陽性對照OD一般不小于0.8，陰性對照一般不高于0.15，陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品OD大于陰性O(shè)D+0.15，陰性O(shè)D低于0.05按0.05算）。

五、產(chǎn)品特點(diǎn)：高靈敏度、高特異性、結(jié)果容易判定。

六、保存條件：不開啟2-8℃避光保存效期一年。不正確存放或過于頻繁開啟使用有可能因此使效期縮短。

七、注意事項(xiàng)：

1、雖然本試劑盒過期后很久還有使用價(jià)值但還是請您在標(biāo)簽注明的有效期內(nèi)使用。

2、在檢測腹水類單抗時(shí)要稀釋到1/5萬，雖然可以分辨但并不建議您這樣做。此類樣品成分十分復(fù)雜，有干擾結(jié)果的可能。在此種情況下您可以選擇本公司的貨號(hào)為C060102的鑒定試劑。它會(huì)給您帶來滿意的結(jié)果,同時(shí)您也可以使用抗原包被板替換試劑盒內(nèi)的包被板來解決此類問題，但這種情況下陽性對照不顯色屬于正常。

3、手洗板子時(shí)一定要把孔加滿，停留10秒然后棄盡，甩干凈。特別是在酶標(biāo)二抗溫育后洗板時(shí)一定要把酶吸出而不是甩出，要吸凈。這個(gè)在手工洗板時(shí)對結(jié)果很重要。

4、一次沒用完的板子要帶干燥劑放自封袋封好，隨盒存放。

5、拿放板子時(shí)不要?jiǎng)×叶秳?dòng)，以免孔間交叉污染出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果。

6、本試劑一般不會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)陽性，但出現(xiàn)兩個(gè)陽性的現(xiàn)象現(xiàn)實(shí)中是真實(shí)存在的，一般會(huì)一個(gè)OD很高,另一個(gè)很低但卻還能判為陽性，實(shí)驗(yàn)分析表明這種情況下以O(shè)D高值孔為準(zhǔn)，出現(xiàn)這種情況有多重原因：A、培養(yǎng)的細(xì)胞中有“飼養(yǎng)細(xì)胞"殘留，B、由于單抗研制存在人工干預(yù)步驟因此抗體本身有可能會(huì)存在亞類結(jié)構(gòu)上的輕微變異， C、樣品為非特異親和純化的抗體或樣品是腹水，D、上清出現(xiàn)少量污染，E、實(shí)驗(yàn)操作粗放，F(xiàn)、加錯(cuò)試劑。

八、特別提示：不具備ELISA基礎(chǔ)知識(shí)和操作的人員不要完成此實(shí)驗(yàn)或類似實(shí)驗(yàn)，因?yàn)檫@可能會(huì)給您帶來錯(cuò)誤的結(jié)果和不必要的損失