肝素親和柱
肝素（Heparin）親和柱
1. 產(chǎn)品介紹
乳鐵蛋白是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外開(kāi)發(fā)研究速度最快的一種營(yíng)養(yǎng)添加劑，由于其具有廣譜抗菌、抗病毒感染、調(diào)節(jié)體內(nèi)鐵平衡、調(diào)解骨髓細(xì)胞的生成、抑制人體腫瘤細(xì)胞、同多種抗生素及抗真菌制劑協(xié)同有效治療疾病等功效，使其產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外乳制品加工中的應(yīng)用范圍日益廣泛。

肝素親和柱能夠特異性的純化樣品中的乳鐵蛋白，本產(chǎn)品采用了柱狀瓊脂糖凝膠作為固相載體，瓊脂糖凝膠與肝素偶聯(lián)形成免疫吸附劑，裝柱制成免疫親和柱，能夠特異性的純化樣品中的乳鐵蛋白，樣品前處理后，通過(guò)免疫親和柱凈化，乳鐵蛋白特異性吸附在親和柱上，用淋洗液將免疫親合柱上的雜質(zhì)除去，用洗脫液通過(guò)分離柱，將乳鐵蛋白親和柱上分離下來(lái)，最后，將洗脫液注入HPLC或LC-MS進(jìn)行測(cè)定。

2. 用途
適用于乳、乳粉等食品中乳鐵蛋白含量測(cè)定；樣品中乳鐵蛋白的凈化，提取等。操作流程
結(jié)合緩沖液：50 mM磷酸鹽緩沖液、pH8.0左右

洗脫緩沖液：50 mM磷酸鹽緩沖液，2 M NaCl，pH8.0 左右

（1）樣品處理：

（注：適當(dāng)調(diào)節(jié)樣品稱(chēng)取量，使樣品中乳鐵蛋白含量應(yīng)控制在3mg以?xún)?nèi)。）

①乳粉：精確稱(chēng)取 2g樣品，置于玻璃燒杯中，加入已預(yù)熱至40 ℃左右（不可超過(guò)50℃）的結(jié)合緩沖液35 mL ，用玻璃棒攪拌使其溶解均勻。將其轉(zhuǎn)移至50 mL 容量瓶中，用少量的結(jié)合緩沖液分次洗滌燒杯和玻璃棒，洗滌液一并移入容量瓶中，用結(jié)合緩沖液定容至50ml，混勻，倒入50 mL離心管中，在4℃條件下離心（5000r、10min，棄掉上層油脂，底層沉淀，取中間層）或微纖維過(guò)濾方式去除油脂和雜質(zhì)，準(zhǔn)確吸取10 mL作為樣品液。

②奶液：稱(chēng)取適量樣品（以不超過(guò)3mg乳鐵蛋白載量為原則，例如：普通牛奶中乳鐵蛋白參考含量小于0.5mg/g，建議稱(chēng)量10-20g、牛初乳中乳鐵蛋白參考含量1-2mg/g，建議稱(chēng)量2-5g），置于50mL容量瓶中，用結(jié)合緩沖液定容至50ml，混勻，倒入50 mL離心管中，在4℃條件下離心（5000r、10min，棄掉上層油脂，底層沉淀，取中間層）或微纖維過(guò)濾方式去除油脂和雜質(zhì)，準(zhǔn)確吸取10 mL作為樣品液。

（2）柱子預(yù)處理：取出肝素親和柱,恢復(fù)至室溫（22-25℃），將上端塞子取出，打開(kāi)下端堵頭，將柱內(nèi)保存液流掉至高于凝膠上界面3-5mm處，加入總體積10ml的結(jié)合緩沖液平衡柱子（柱子不要走干）。

（3）加樣：加入處理好的樣品10ml，以流速為1-2滴/秒上樣，直至樣品全部通過(guò)親和柱至凝膠上界面（柱子不要走干）。

（4）淋洗：加入10mL結(jié)合緩沖液淋洗柱子，除去雜質(zhì)，適當(dāng)給一些壓力，調(diào)節(jié)流速為1-2滴/秒，直至樣品全部通過(guò)肝素親和柱，并排干。

（5）洗脫：加入4ml洗脫緩沖液，調(diào)節(jié)流速為1-2秒每滴，緩慢洗脫并排干，收集全部洗脫液，以洗脫緩沖液定容至4ml，即為凈化后樣品。

（6）檢測(cè)：凈化后樣品用質(zhì)譜，高效液相、熒光等方法進(jìn)行檢測(cè)。
肝素親和柱